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Selisistat (EX-527) SIRT1 Inhibitor

Kat.-Nr.: S1541

Selisistat (EX 527, SEN0014196) ist ein potenter und selektiver SIRT1-Inhibitor mit einer IC50 von 38 nM in einem zellfreien Assay und zeigt eine >200-fache Selektivität gegenüber SIRT2 und SIRT3. Phase 2.
Selisistat (EX-527) Sirtuin Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 248.71

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.78%
99.78

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
Platelets Apoptosis Assay 10/50 μM 10 min DMSO increases ROS level in a dose-dependent manner 25829495
HEK 293 Growth Inhibition Assay 24 h IC50=97.7 ± 8.1 μM 24998427
HeLa Growth Inhibition Assay 24 h IC50=37.9 ± 1.8 μM 24998427
HEK 293 Growth Inhibition Assay 48 h IC50=69.0 ± 0.7 μM 24998427
HeLa Growth Inhibition Assay 48 h IC50=8.9 ± 1.9 μM 24998427
RMECs Apoptosis Assay 10 μM 24 h attenuates the anti-apoptotic effect of Des-G 24486147
HUVECs Apoptosis Assay 10 μM 24 h bolishes the protective effect of resveratrol in cell viability 23358928
K562 Function Assay 0.1-1 μM 2 h stimulates Nrf2-dependent gene transcription 21196497
INS-1E Function Assay 1 μm 24 h prevents resveratrol-induced up-regulation of Glut2, glucokinase,Pdx-1, and Tfam 21163946
MCF-7  Growth Inhibition Assay 0-100 μM 24/48/72 h DMSO represses cell proliferation at the concentration ≥100 μM 20371709
NCI-H460  Function Assay 1 μm 6 h DMSO produces a concentration-dependent increase in the amount of acetylated p53 16354677
293T Function assay Inhibition of human recombinant GST-tagged SIRT1 expressed in 293T cells by Fluor de Lys fluorescence assay, IC50 = 0.038 μM. 21306906
Escherichia coli cells Function assay Inhibition of human recombinant SIRT1 expressed in Escherichia coli cells using acetylated Lys side chain amino acids 379-382 (Arg-His-Lys-Lys(Ac)) p53 conjugated with aminomethylcoumarin as substrate by fluorescence assay, IC50 = 0.16 μM. 22931526
BL21 (DE3) Function assay Inhibition of full length human SIRT1 expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) cells using fluorogenic 7-amino-4-methylcoumarin (AMC)-labeled peptide by fluorescence assay, IC50 = 0.21 μM. 25275824
Namalwa cells Function assay 3 hrs Inhibition of SIRT1-mediated endogenous p53 deacetylase activity in human Namalwa cells assessed as concentration required to enhance p53 deacetylation to twice the basal level after 3 hrs by ELISA, INH = 0.6 μM. 25971769
BL21 (DE3) Function assay Inhibition of full length human SIRT2 expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) cells using fluorogenic 7-amino-4-methylcoumarin (AMC)-labeled peptide by fluorescence assay, IC50 = 1.94 μM. 25275824
Escherichia coli cells Function assay Inhibition of human recombinant SIRT2 expressed in Escherichia coli cells using acetylated Lys side chain amino acids 379-382 (Arg-His-Lys-Lys(Ac)) p53 conjugated with aminomethylcoumarin as substrate by fluorescence assay, IC50 = 48.5 μM. 22931526
A673 qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells 29435139
SK-N-MC qHTS assay qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells 29435139
Hs683 Cell cycle assay 24 to 48 hrs Cell cycle arrest in human Hs683 cells assessed as accumulation at G1 phase at IC50 after 24 to 48 hrs by propidium iodide staining-based flow cytometry 28475330
HCT116 Function assay 10 uM 8 hrs Inhibition of SIRT1 in human HCT116 cells assessed as increase in acetylated p53 at 10 uM after 8 hrs by Western blot analysis 22642300
NCI-H460 Function assay 6 hrs Inhibition of SIRT-2 in human NCI-H460 cells assessed as inhibition of p53 deacetylation after 6 hrs by immunoprecipitation/immunoblotting analysis, IC50 = 1 μM. ChEMBL
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 248.71 Formel

C13H13ClN2O

 Lagerung (Ab Erhaltdatum)
CAS-Nr. 49843-98-3 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme SEN0014196 Smiles C1CC(C2=C(C1)C3=C(N2)C=CC(=C3)Cl)C(=O)N

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 300 mg/mL (1206.22 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 30 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewicht-Rechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie unten die Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier einplanen, um Verluste während des Experiments auszugleichen)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, nicht die Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn im Abschnitt Löslichkeit keine In-vivo-Formulierung angegeben ist.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammflüssigkeit: mg Wirkstoff voraufgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammflüssigkeit mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der jeweiligen Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzuμL PEG300, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzuμL Tween 80, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzu μL ddH2O, mischen und aufklären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzu μL Maisöl, mischen und aufklären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, die Lösungsmittel in der richtigen Reihenfolge hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die im vorherigen Schritt erhaltene Lösung klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen. Physikalische Methoden wie Vortexen, Ultraschall oder ein warmes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösungsvorgangs verwendet werden.

Wirkungsmechanismus (Mechanism of Action)

Eigenschaften
Greater potency, specificity, stability, and lower toxicity than other inhibitors of SIRT1 catalytic activity identified to date.
Targets/IC50/Ki
SIRT1
(Cell-free assay)
38 nM
In vitro

Selisistat (EX 527) exhibits a potently inhibitory effect against SIRT1 deacetylase activity in a concentration-dependent manner with an IC50 of 38 nM, and displays much lower activity against SIRT2 and SIRT3 with IC50 values of 19.6 μM and 48.7 μM, respectively. It does not inhibit SIRT4-7 and class I/II HDAC activity at concentrations up to 100 μM. This compound alone (1 μM) has no detectable effect on the acetylation of p53 lysine 382 in NCI-H460 cells, but significantly increases the amount of acetylated p53 in NCI-H460 cells, human mammary epithelial cells, U-2 OS and MCF-7 cells subjected to genotoxic agents Hydrogen peroxide, which is more effective than that caused by Nicotinamide (5 mM). Surprisingly, it does not result in detectable effects on p53-controled gene expression, cell survival, or cell proliferation. It causes a 90% increase in cell number of HCT116 cells after 7 days in the condition of 0.1% serum but not 10% serum, suggesting that SIRT1 is a significant regulator of cell proliferation during growth factor deprivation conditions. Additionally, it abrogates resveratrol effects on glucose responses, and prevents resveratrol-induced up-regulation of Glut2, glucokinase, Pdx-1, and Tfam in INS-1E Cells, due to the opposite effect of EX 527 and resveratrol on SIRT1 deacetylase activity.

Kinase-Assay
Hemmung der GST-SIRT1-Deacetylase-Aktivität
293T-Zellen werden transient mit GST-markiertem humanem SIRT1 im pDEST27 Gateway-Vektor unter Verwendung von FuGENE-6 transfiziert. Nach 48 Stunden werden die Zellen mit 50 mM Tris, pH 8,0, 120 mM NaCl, 1 mM EDTA und 0,5 % Nonidet P-40, ergänzt mit Complete Mini Protease-Inhibitor-Cocktail-Tabletten, lysiert. GST-SIRT1 wird aus den Lysaten gereinigt und ausgiebig in dem oben genannten Puffer gewaschen. Der Deacetylierungs-Assay wird mit etwa 30 ng GST-SIRT1 in Gegenwart von Selisistat (EX 527) (48 pM bis 100 μM) durchgeführt. Die Deacetylierung wird mit dem Fluor de Lys-Kit unter Verwendung eines fluorogenen Peptids gemessen, das die Reste 379 bis 382 von p53 umfasst, acetyliert an Lysin 382. Der acetylierte Lysinrest ist an eine Aminomethylcoumarin-Einheit gekoppelt. Das Peptid wird durch SIRT1 deacetyliert, gefolgt von der Zugabe eines proteolytischen Entwicklers, der das fluoreszierende Aminomethylcoumarin freisetzt. Kurz gesagt, Enzympräparate werden mit 170 μM NAD+ und 100 μM p53 fluorogenem Peptid 45 Minuten bei 37 °C inkubiert, gefolgt von einer Inkubation im Entwickler für 15 Minuten bei 37 °C. Die Fluoreszenz wird durch Anregung bei 360 nm und Emission bei 460 nm gemessen und die enzymatische Aktivität wird in relativen Fluoreszenzeinheiten ausgedrückt.
In vivo

Administration of Selisistat (EX 527; ~10 μg) to rats increases hypothalamic acetyl-p53 levels by inhibiting hypothalamic SIRT1 activity. Co-administration of this compound with ghrelin markedly blunts the orexigenic action of ghrelin by decreasing the pAMPK levels, increasing the ACC levels, and abolishing the higher expression of the transcription factors FoxO1, pCREB, and Bsx and the neuropeptides NPY and AgRP in the hypothalamic arcuate nucleus.

Referenzen
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21386086/

Anwendungen (Applications)

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot GRP78 / FASL / Bcl-2 / LC3 Ac-H3K9 / Fibronectin / Collagen 1 / α-SMA PCNA / Cyclin D1 / Cyclin E pEGFR / EGFR / pPDGFRβ / PDGFRβ pSTAT3 / STAT3 p27 FOXO3a / SIRT1 / Ac-p53 / p16(INK4a)
S1541-WB1
29312612
Immunofluorescence p-p38
S1541-IF1
26824501
Growth inhibition assay Cell viability
S1541-viability1
24484175

Informationen zu klinischen Studien (Clinical Trial Information)

(Daten von https://clinicaltrials.gov, aktualisiert am 2021-11-17)

NCT-Nummer Rekrutierung Bedingungen Sponsor/Kollaboratoren Startdatum Phases
NCT04184323 WITHDRAWN
Endometriosis; Uterine Diseases; Endometrial Diseases; Infertility Unexplained; Infertility; Female, Nonimplantation
Wake Forest University Health Sciences
 2022-01 PHASE2
NCT01485965 Completed
Huntington''s Disease
Siena Biotech S.p.A.
 2011-11 Phase 1
NCT01521832 Completed
Huntington''s Disease
Siena Biotech S.p.A.
 2009-10 Phase 1

Häufig gestellte Fragen (FAQ) (Frequently Asked Questions)

Frage 1:
what is the extinction coefficient of it?

Antwort:
Its extinction coefficient is 1421.650635.