Home PI3K/Akt/mTOR PDK Inhibitor BX-912

Nur für die Forschung bestimmt

BX-912 PDK Inhibitor

Kat.-Nr.: S1275

BX-912 ist ein potenter und spezifischer PDK1-Inhibitor mit einem IC50-Wert von 12 nM und einer 9- bzw. 105-fach höheren Selektivität für PDK1 gegenüber PKA und PKC in zellfreien Assays. Im Vergleich zu GSK3β ist die Selektivität für PDK1 600-fach höher.
BX-912 PDK Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 471.35

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: S127501 DMSO]94 mg/mL]false]Ethanol]94 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Reinheit: 99.80%
  • In Nature Medicine für seine erstklassige Qualität zitiert
  • COA
  • NMR
  • SDS
  • Datenblatt
99.80

Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 471.35 Formel

C20H23BrN8O

 Lagerung (Ab Erhaltdatum)
CAS-Nr. 702674-56-4 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles C1CCN(C1)C(=O)NC2=CC=CC(=C2)NC3=NC=C(C(=N3)NCCC4=CN=CN4)Br

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 94 mg/mL (199.42 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 94 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewicht-Rechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie unten die Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier einplanen, um Verluste während des Experiments auszugleichen)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, nicht die Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn im Abschnitt Löslichkeit keine In-vivo-Formulierung angegeben ist.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammflüssigkeit: mg Wirkstoff voraufgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammflüssigkeit mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der jeweiligen Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzuμL PEG300, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzuμL Tween 80, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzu μL ddH2O, mischen und aufklären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzu μL Maisöl, mischen und aufklären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, die Lösungsmittel in der richtigen Reihenfolge hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die im vorherigen Schritt erhaltene Lösung klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen. Physikalische Methoden wie Vortexen, Ultraschall oder ein warmes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösungsvorgangs verwendet werden.

Wirkungsmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
PDK-1
(Cell-free assay)
12 nM
PKA
(Cell-free assay)
110 nM
KDR
(Cell-free assay)
410 nM
CDK2/CyclinE
(Cell-free assay)
650 nM
Chk1
(Cell-free assay)
830 nM
c-Kit
(Cell-free assay)
850 nM
In vitro
BX912 prevents ChcK1, PKA, c-kit, and KDR with IC50 of 0.83, 0.11, 0.85, and 0.41 μM, resepectively. BX912 blocks PDK1/Akt signaling in tumor cells and suppresses the anchorage-dependent growth of a variety of tumor cell lines (such as PC-3 cells ) in culture or induces apoptosis. A number of cancer cell lines (such as MDA-468 breast cancer) with elevated Akt activity are >30-fold more sensitive to growth inhibition by PDK1 inhibitor BX912 in soft agar than on tissue culture plastic, consistent with the cell survival function of the PDK1/Akt signaling pathway, which is particularly important for unattached cells. BX912 potently blocks PDK1 enzyme activity in a direct kinase assay format, although BX912 fails to block preactivated AKT2 activity (IC50 > 10 μM). Therefore, BX-912 is a direct inhibitor of PDK1. BX912 is a competitive inhibitor of PDK1 activity with respect to its substrate, ATP, suggesting that BX912 binds to the ATP binding pocket of PDK1. The aminopyrimidine backbone of BX912 adopts a similar orientation in the active site of PDK1. BX912 promotes a pronounced increase in the population of MDA-468 cells with 4 N DNA content, indicative of a block at the G2/M phase of the cell cycle. BX912 also potently inhibits the growth of HCT-116 cells in soft agar, showing a 96% inhibitory effect at a dose of 1 μM. BX912 potently inhibits the growth of PC-3 cells in soft agar, displaying IC50 of 0.32 μM.
Kinase-Assay
Kinase-Assays
PDK1 wird in einem direkten Kinase-Assay und einem gekoppelten Assay-Format untersucht, das die PDK1- und PtdIns-3,4-P2-vermittelte Aktivierung von AKT2 misst. Für den gekoppelten Assay enthielt die endgültige Assay-Mischung (60 μL): 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL Rinderserumalbumin, 18 mM β-Glycerophosphat, 0,7 mM Dithiothreit, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 μM ATP, 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 7,5 μM biotinyliertes Peptidsubstrat (Biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 μL PtdIns-3,4-P2-haltige Phospholipidvesikel, 60 pg gereinigtes rekombinantes humanes PDK1 und 172 ng gereinigtes rekombinantes humanes AKT2. Nach Inkubation für 2 Stunden bei Raumtemperatur wird das biotinmarkierte Peptid aus 10 μL der Assay-Mischung auf Streptavidin-beschichteten SPA-Beads eingefangen, und die Produktbildung wird durch Szintillationsnähe in einem Wallac MicroBeta-Zähler gemessen. Das gebildete Produkt ist proportional zur Inkubationszeit und zur Menge des zugegebenen PDK1 und inaktiven AKT2. PDK1 wird in suboptimalen Mengen zugegeben, so dass der Assay Inhibitoren der AKT2-Aktivierung sowie den direkten Inhibitor BX912 von PDK1 oder AKT2 empfindlich nachweisen konnte. Zur direkten Messung der PDK1-Aktivität enthielt die endgültige Assay-Mischung (60 μL): 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% β-Mercaptoethanol, 1 mg/mL Rinderserumalbumin, 10 mM MgOAc, 10 μM ATP, 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 7,5 μM Substratpeptid (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) und 60 ng gereinigtes rekombinantes humanes PDK1. Nach 4 Stunden bei Raumtemperatur werden 25 mM EDTA zugegeben und ein Teil der Reaktionsmischung auf P81-Phosphocellulosepapier aufgetragen. Das Filterpapier wird dreimal mit 0,75%iger Phosphorsäure und einmal mit Aceton gewaschen. Nach dem Trocknen wird das filtergebundene markierte Peptid mit einem Phosphorimager quantifiziert.
Referenzen