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GSK-J4 Hydrochloride H3K27 Histon-Demethylase-Inhibitor

Kat.-Nr.: S7070

GSK J4 HCl ist ein zellgängiges Prodrug von GSK J1, dem ersten selektiven Inhibitor der H3K27 histone demethylase JMJD3 und UTX mit einer IC50 von 60 nM in einem zellfreien Assay und inaktiv gegen eine Reihe von Demethylasen der JMJ-Familie.
GSK-J4 Hydrochloride Histone Demethylase Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 453.96

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.48%
99.48

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
CUTLL1 Growth inhibitory assay 2 μM DMSO affects cell growth 25132549
CUTLL1 Apoptosis assay 2 μM DMSO induces apoptosis 25132549
CUTLL1 Function assay 2 μM DMSO induces cell cycle arrest 25132549
CUTLL1 Kinase assay 6 μM DMSO leads to increased H3K27me3 25132549
SF7761 Kinase assay 6 μM DMSO increases K27 methylation 25401693
SF8628 Kinase assay 6 μM DMSO increases K28 methylation 25401693
H3.3 Kinase assay 6 μM DMSO increases K29 methylation 25401693
SF9012 Kinase assay 6 μM DMSO increases K30 methylation 25401693
SF9402 Kinase assay 6 μM DMSO increases K31 methylation 25401693
SF9427 Kinase assay 6 μM DMSO increases K32 methylation 25401693
human astrocytes Kinase assay 6 μM DMSO increases K33 methylation 25401693
SF7761 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K27M glioma cell growth 25401693
SF8628 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K28M glioma cell growth 25401693
H3.3 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K29M glioma cell growth 25401693
SF9012 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K30M glioma cell growth 25401693
SF9402 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K31M glioma cell growth 25401693
SF9427 Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K32M glioma cell growth 25401693
human astrocytes Growth inhibitory assay 6 μM DMSO inhibits K33M glioma cell growth 25401693
TG neurons Function assay 50 μM DMSO inhibits HSV-1 reactivation from sensory neurons 25552720
Th17 Function assay 80 nM DMSO inhibits cell differentiation 25840993
β-cells Function assay 20 μM DMSO blunts IFNγ, Il-1β, and TNFα-induced chemokine gene expression 26505193
β-cells Function assay 20 μM DMSO induces β-cell dysfunction 26505193
ESCs Function assay 1.8 µM DMSO induces DNA damage along with activation of the DNA damage response 26759175
Raw 264.7 Function assay 0.8192 µM DMSO inhibits TNF-α production 26776360
MCF7 Function assay 1 to 10 uM 30 hrs Inhibition of KDM5A in human MCF7 cells assessed as effect on H3K4me3 methylation levels at 1 to 10 uM after 30 hrs by Western blot analysis 30392349
MCF7 Function assay 1 to 10 uM 30 hrs Inhibition of KDM5A in human MCF7 cells assessed as effect on H3K27me3 methylation levels at 1 to 10 uM after 30 hrs by Western blot analysis 30392349
RAW264.7 0.82 uM 24 hrs Inhibition of LPS-induced TNFalpha production in mouse RAW264.7 cells 0.82 uM after 24 hrs by ELISA 26776360
RAW264.7 24 hrs Inhibition of LPS-induced TNFalpha production in mouse RAW264.7 cells after 24 hrs by ELISA 26776360
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 453.96 Formel

C24H27N5O2.HCl

 Lagerung (Ab Erhaltdatum)
CAS-Nr. 1797983-09-5 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 91 mg/mL (200.45 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 91 mg/mL

Water : 10 mg/mL

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewicht-Rechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie unten die Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier einplanen, um Verluste während des Experiments auszugleichen)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, nicht die Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn im Abschnitt Löslichkeit keine In-vivo-Formulierung angegeben ist.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammflüssigkeit: mg Wirkstoff voraufgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammflüssigkeit mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der jeweiligen Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzuμL PEG300, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzuμL Tween 80, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzu μL ddH2O, mischen und aufklären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzu μL Maisöl, mischen und aufklären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, die Lösungsmittel in der richtigen Reihenfolge hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die im vorherigen Schritt erhaltene Lösung klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen. Physikalische Methoden wie Vortexen, Ultraschall oder ein warmes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösungsvorgangs verwendet werden.

Wirkungsmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
JMJD3
(Cell-free assay)
60 nM
In vitro

GSK J4 HCl is an ethyl ester derivative of the JMJD3 selective histone demethylase inhibitor GSK-J1 with an IC50 value greater than 50 μM in vitro. This compound is used to probe the consequences of demethylation of H3K27me3. In human primary macrophages, this chemical inhibits the lipopolysaccharide-induced production of cytokines, including pro-inflammatory tumour necrosis factor (TNF). In addition, it prevents the lipopolysaccharide-induced loss of H3K27me3 associated with the TNF transcription start sites and blocked the recruitment of RNA polymerase II.

Kinase-Assay
Histon-Demethylase AlphaScreen
Die Hemmung von Histon-Demethylasen wird mithilfe des Histon-Demethylase-AlphaScreen-Assays (Amplified Luminescence Proximity Homogenous Assay) beurteilt. Dieser Assay verwendet ein biotinyliertes Peptidsubstrat und basiert auf dem Nachweis des Produktmethylierungszeichens mithilfe eines spezifischen Antikörpers, der an Protein-A-Akzeptor-Beads gekoppelt ist, und einer Streptavidin-Donor-Bead zum Einfangen des Peptids. Kurz gesagt, rekombinante Demethylase-Enzyme werden in Gegenwart von Fe2+ in Form von Eisenammoniumsulfat (FAS), α-Ketoglutarat (KG) und biotinyliertem Peptidsubstrat inkubiert. L-Ascorbinsäure wird hinzugefügt, um ein reduzierendes Milieu zu schaffen und die Oxidation von Fe2+ zu verhindern. Nach der Inkubation mit Peptidsubstrat wird das Vorhandensein des Produkts mithilfe der AlphaScreen-Technologie nachgewiesen. Die Demethylase-AlphaScreen-Assays werden im 384-Well-Plattenformat unter Verwendung von weißen Proxiplatten durchgeführt. Alle Schritte werden in Assay-Puffer (50 mM HEPES pH 7,5, 0,1 % (w/v) BSA und 0,01 % (v/v) Tween-20) durchgeführt. FAS wird jeden Tag frisch in 20 mM HCl auf eine Konzentration von 400 mM gelöst und in entionisiertem Wasser auf 1,0 mM verdünnt. Alle anderen Komponenten werden jeden Tag frisch in entionisiertem Wasser gelöst. Für IC50-Bestimmungen werden 5 μL Assay-Puffer, der Demethylase-Enzym enthält, in die Vertiefungen einer 384-Well-Proxiplatte überführt. Titrationen dieser Verbindung (0,1 μL) werden in jede Vertiefung überführt und die Enzyme 15 Minuten lang mit dieser Chemikalie vorinkubiert (die endgültige DMSO-Konzentration beträgt 1 %). Die Enzymreaktion wird durch Zugabe von 5 μL eines Substratmischung, bestehend aus α-KG, FAS, L-Ascorbinsäure und biotinyliertem Peptidsubstrat, initiiert und die Reaktion für die angegebene Zeit bei Raumtemperatur inkubiert. Die Enzymreaktion wird nach der angegebenen Zeit durch Zugabe von 5 μL EDTA (7,5 mM Endkonzentration im Assay-Puffer) gestoppt. Streptavidin-Donor-Beads (0,08 mg/ml) und Protein-A-konjugierte Akzeptor-Beads (0,08 mg/ml) werden 1 Stunde lang mit einem Antikörper gegen die Produktmethylierungsmarkierung vorinkubiert und das Vorhandensein von Biotin-H3-Produkt wird durch Zugabe von 5 μL der vorinkubierten AlphaScreen-Beads nachgewiesen (Endkonzentrationen von 0,02 mg/ml bezogen auf Akzeptor- und Donor-Beads). Der Nachweis erfolgt 1 Stunde lang bei Raumtemperatur und die Assay-Platten werden in einem BMG Labtech Pherastar FS Plattenlesegerät ausgelesen. Die Daten werden auf die enzymfreie Kontrolle normiert und die IC50 aus der nichtlinearen Regressionskurvenanpassung mit GraphPad Prism 5 bestimmt.
In vivo

GSK-J4 hydrochloride is a potent dual inhibitor of H3K27me3/me2-demethylases JMJD3/KDM6B and UTX/KDM6A. It inhibits LPS-induced TNF-α production in human primary macrophages. This compound is a cell permeable prodrug of GSK-J1.
Referenzen