Home Immunology & Inflammation ROS Aktivator Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate

Nur für die Forschung bestimmt

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS-Aktivator

Kat.-Nr.: S7873

Dinatriumsalz von (R)-2-Hydroxyglutarat (D-α-Hydroxyglutarsäure-Dinatriumsalz) ist ein kompetitiver Inhibitor von α-Ketoglutarat-abhängigen Dioxygenasen mit einem Ki von 10,87 ± 1,85 mM.
Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS Aktivator Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 192.08

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.74%
99.74

Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 192.08 Formel

C5H6Na2O5

 Lagerung (Ab Erhaltdatum)
CAS-Nr. 103404-90-6 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme D-α-Hydroxyglutaric acid disodium Smiles C(CC(=O)[O-])C(C(=O)[O-])O.[Na+].[Na+]

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

Water : 38 mg/mL

DMSO : Insoluble
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewicht-Rechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie unten die Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier einplanen, um Verluste während des Experiments auszugleichen)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, nicht die Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn im Abschnitt Löslichkeit keine In-vivo-Formulierung angegeben ist.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammflüssigkeit: mg Wirkstoff voraufgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammflüssigkeit mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der jeweiligen Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzuμL PEG300, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzuμL Tween 80, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzu μL ddH2O, mischen und aufklären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzu μL Maisöl, mischen und aufklären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, die Lösungsmittel in der richtigen Reihenfolge hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die im vorherigen Schritt erhaltene Lösung klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen. Physikalische Methoden wie Vortexen, Ultraschall oder ein warmes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösungsvorgangs verwendet werden.

Wirkungsmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
α-ketoglutarate-dependent dioxygenase
In vitro
In U-87MG cells, (R)-2-Hydroxyglutarate acts as weak antagonists of α-KG to inhibit α-KG-dependent histone demethylases and increases dimethylation on both H3K9 and H3K79. Besides, (R)-2-Hydroxyglutarate inhibits ATP synthase and mTOR signaling, and thus causes growth arrest and tumor cell killing.
Kinase-Assay
Enzymatische Assays
Zur Bestimmung der humanen JHDM1A/KDM2A-Demethylaseaktivität gegenüber H3K36me2 wird His-markiertes JHDM1A zuerst durch Transformation von pET28a-JHDM1A in Escherichia coli BL21 erhalten, und die Proteinexpression wird durch Zugabe von 1 mM IPTG bei 30 °C induziert, wenn die Zelldichte 0,5 OD600-Einheiten erreicht. Die Zellen werden durch Sonikation lysiert und Ni-NTA-Agarose wird zur Reinigung der His-JHDM1A-Fusionsproteine verwendet. Der Histon-Demethylase-Assay wird durchgeführt, indem 2 μg Oligonukleosomen, 4 μg gereinigtes His-JHDM1A und/oder 10–50 mM L- oder D-2-HG in Histon-Demethylierungs-Puffer [50 mM HEPES (pH 8,0), 625 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 0,1–0,5 mM α-KG, 2 mM Ascorbat] bei 37 °C für 2–3 Stunden inkubiert werden, und die Reaktionen werden durch Zugabe von SDS-Ladepuffer gestoppt und anschließend mittels Western Blotting unter Verwendung eines Anti-H3K36me2-Antikörpers analysiert. Zur Messung der CeKDM7A-Demethylaseaktivität gegenüber H3K9me2 und H3K27me2 werden zwei synthetische dimethylierte Peptide H3K9me2 [ARTKQTARK (me2)STGGKA] und H3K27me2 [QLATKAARK (me2)SAPAS] als Substrate verwendet. Demethylase-Assays werden in Anwesenheit von 10 μg Enzym, 1 μg Peptid in 20 μl Puffer 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 50 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 100 μM α-KG, 2 mM Vc, 10 mM PMSF für 3 Stunden durchgeführt. Das Demethylierungs-Reaktionsgemisch wird durch Passage durch eine C18 ZipTip entsalzt. Um die hemmende Wirkung von 2-HG zu untersuchen, werden verschiedene Konzentrationen von 2-HG kurz vor Zugabe anderer Reaktionsgemische mit KDM7A inkubiert. Die Proben werden mit einem MALDI-TOF/TOF-Massenspektrometer analysiert.
Referenzen