Home Immunology & Inflammation SPHK Inhibitor Opaganib (ABC294640)

Nur für die Forschung bestimmt

Opaganib (ABC294640) SphK2-Inhibitor

Kat.-Nr.: S7174

Opaganib (ABC294640) ist ein oral bioverfügbarer und selektiver Sphingosin-Kinase-2 (SphK2)-Inhibitor mit einer IC50 von etwa 60 μM. Phase 1/2.
Opaganib (ABC294640) SPHK Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 380.91

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.73%
99.73

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
Sf9 Function assay Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM 25643074
Sf9 Function assay 2 hrs Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM 30889352
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 380.91 Formel

C23H25ClN2O

 Lagerung (Ab Erhaltdatum)
CAS-Nr. 915385-81-8 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewicht-Rechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie unten die Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier einplanen, um Verluste während des Experiments auszugleichen)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, nicht die Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn im Abschnitt Löslichkeit keine In-vivo-Formulierung angegeben ist.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammflüssigkeit: mg Wirkstoff voraufgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammflüssigkeit mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der jeweiligen Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzuμL PEG300, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzuμL Tween 80, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzu μL ddH2O, mischen und aufklären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzu μL Maisöl, mischen und aufklären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, die Lösungsmittel in der richtigen Reihenfolge hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die im vorherigen Schritt erhaltene Lösung klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen. Physikalische Methoden wie Vortexen, Ultraschall oder ein warmes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösungsvorgangs verwendet werden.

Wirkungsmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
SphK2
(Cell-free assay)
60 μM
In vitro
Opaganib (ABC294640) markedly alters the ratio of ceramide/S1P consistent with inhibition of SK activity in MDA-MB-231 cells. It inhibits tumor cell proliferation with IC50 values ranging from approximately 6 to 48 μM, and impairs tumor cell migration concomitant with loss of microfilaments. This compound induces nonapoptotic cell death, morphological changes in lysosomes, formation of autophagosomes, and increases in acidic vesicles in A-498, PC-3, and MDA-MB-231 cells. In both MCF-7 and ER-transfected HEK293 cells, it decreases E2-stimulated ERE-luciferase activity.
Kinase-Assay
Sphingosinkinase-Assays
Die IC50-Werte für Opaganib (ABC294640) und DMS werden mittels eines neu entwickelten HPLC-basierten SK-Aktivitätstests bestimmt. Kurz gesagt, werden die Testverbindungen mit rekombinantem SK1 oder SK2 und NBD-Sph in den isozymselektiven Assaypuffern inkubiert, die unten detailliert sind, mit 1 mg/ml fettsäurefreiem Rinderserumalbumin, 100 μM ATP und 400 μM MgCl2. Das Produkt, d.h. NBD-S1P, wird von NBD-Sph mittels HPLC wie folgt getrennt: Waters 2795 HPLC-System mit einem Waters 2495 Fluoreszenzdetektor, C8 Chromolith RP-8e Säule (100 × 4,6 mm), 1 ml/min mobile Phase (Acetonitril/20 mM Natriumphosphatpuffer, pH 2,5, bei 45:55). Die Fluoreszenz wird bei einer Anregung von 465 nm und einer Emission von 531 nm überwacht. Das Verhältnis von NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) wird als Maß für die SK-Aktivität verwendet. Die SK-Isozym-selektiven Assaypuffer enthielten jeweils 20 mM Tris, pH 7,4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-Mercaptoethanol, 5% Glycerin, 1× Proteaseinhibitoren und 1× Phosphataseinhibitoren. Für den SK1-Assaypuffer wird 0,25% (final) Triton X-100 hinzugefügt; und für den SK2-Puffer wird 1 M (final) KCl hinzugefügt. Die Assays werden 2 Stunden bei Raumtemperatur durchgeführt, und dann wird ein 1,5-faches Volumen Methanol hinzugefügt, um die Kinase-Reaktion zu beenden. Nach 10 Minuten werden die Proben bei 20.000 g zentrifugiert, um das präzipitierte Protein abzuscheiden, und die Überstände werden mittels HPLC analysiert. In Experimenten zur Bestimmung des Ki für die Hemmung von SK2 durch diese Verbindung wird das ADP Quest Assay-System verwendet, um die Kinase-Aktivität in Gegenwart variierender Konzentrationen von Sphingosin und ihr zu messen. Um die Auswirkungen von Opaganib auf die zelluläre SK-Aktivität zu bestimmen, werden nahezu konfluente MDA-MB-231-Zellen über Nacht serumgehungert und dann mit variierenden Konzentrationen von ihm behandelt. Die Zellen werden dann mit [3H]Sphingosin in einer Endkonzentration von 1 μM inkubiert. Die Zellen nehmen das exogene Sphingosin auf, das über die SK-Aktivität in S1P umgewandelt wird, und [3H]S1P wird durch Extraktion von [3H]Sphingosin getrennt und durch Szintillationszählung quantifiziert.
In vivo
Opaganib (ABC294640) significantly reduces tumor growth in mice bearing mammary adenocarcinoma xenografts, associated with depletion of S1P levels. In severe combined immunodeficient mice bearing A-498 xenografts, it delays tumor growth and elevates autophagy markers. This compound also protects against liver transplantation-induced inflammation and cross-talk between innate and adaptive immunities, major events precipitating and exacerbating graft injury, and improves liver function and survival.
Referenzen
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Anwendungen (Applications)

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3
S7174-WB1
27517489
Growth inhibition assay Cell proliferation
S7174-viability1
25122609

Informationen zu klinischen Studien (Clinical Trial Information)

(Daten von https://clinicaltrials.gov, aktualisiert am 2024-05-22)

NCT-Nummer Rekrutierung Bedingungen Sponsor/Kollaboratoren Startdatum Phases
NCT02939807 Withdrawn
Carcinoma Hepatocellular
Medical University of South Carolina|National Cancer Institute (NCI)|Apogee Biotechnology Corporation
 September 30 2019 Phase 2
NCT03377179 Completed
Cholangiocarcinoma|Cholangiocarcinoma Non-resectable|Cholangiocarcinoma Perihilar|Cholangiocarcinoma Extrahepatic|Cholangiocarcinoma Intrahepatic
RedHill Biopharma Limited
 March 7 2018 Phase 2
NCT02757326 Terminated
Multiple Myeloma
RedHill Biopharma Limited|Apogee Biotechnology Corporation|Duke University|National Cancer Institute (NCI)
 December 13 2016 Phase 1|Phase 2
NCT02229981 Withdrawn
Diffuse Large B Cell Lymphoma|Kaposi Sarcoma
RedHill Biopharma Limited|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans|Apogee Biotechnology Corporation
 July 2014 Phase 1|Phase 2
NCT01488513 Completed
Pancreatic Cancer|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific
RedHill Biopharma Limited|Apogee Biotechnology Corporation|Medical University of South Carolina|FDA Office of Orphan Products Development|National Cancer Institute (NCI)
 August 2011 Phase 1