Home Cell Cycle Aurora Kinase Inhibitor Hesperadin

Nur für die Forschung bestimmt

Hesperadin Aurora B Inhibitor

Kat.-Nr.: S1529

Hesperadin hemmt Aurora B mit einem IC50 von 250 nM in einem zellfreien Assay. Es reduziert die Aktivität von AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 und PHK deutlich, während es die MKK1-Aktivität in vivo nicht hemmt.
Hesperadin Aurora Kinase Inhibitor Chemical Structure

Chemische Struktur

Molekulargewicht: 516.65

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Qualitätskontrolle (Quality Control)

Charge: Reinheit: 99.09%
99.09

Zellkultur, Behandlung & Arbeitskonzentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Zelllinien Assay-Typ Konzentration Inkubationszeit Formulierung Aktivitätsbeschreibung PMID
HepG2 cells Cytotoxicity assay 48 h Cytotoxicity against human HepG2 cells after 48 hrs by MTT assay, TC50=0.2 μM
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Chemische Informationen, Lagerung & Stabilität (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekulargewicht 516.65 Formel

C29H32N4O3S

 Lagerung (Ab Erhaltdatum)
CAS-Nr. 422513-13-1 SDF herunterladen Lagerung von Stammlösungen

Synonyme N/A Smiles CCS(=O)(=O)NC1=CC2=C(C=C1)NC(=C2C(=NC3=CC=C(C=C3)CN4CCCCC4)C5=CC=CC=C5)O

Löslichkeit (Solubility)

In vitro
Charge:

DMSO : 100 mg/mL (193.55 mM)
(Feuchtigkeitskontaminiertes DMSO kann die Löslichkeit verringern. Verwenden Sie frisches, wasserfreies DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molaritätsrechner

Masse Konzentration Volumen Molekulargewicht
Verdünnungsrechner Molekulargewicht-Rechner

In vivo
Charge:

In-vivo-Formulierungsrechner (Klare Lösung)

Schritt 1: Geben Sie unten die Informationen ein (Empfohlen: Ein zusätzliches Tier einplanen, um Verluste während des Experiments auszugleichen)

mg/kg g μL

Schritt 2: Geben Sie die In-vivo-Formulierung ein (Dies ist nur der Rechner, nicht die Formulierung. Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn im Abschnitt Löslichkeit keine In-vivo-Formulierung angegeben ist.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berechnungsergebnisse:

Arbeitskonzentration: mg/ml;

Methode zur Herstellung der DMSO-Stammflüssigkeit: mg Wirkstoff voraufgelöst in μL DMSO ( Konzentration der Stammflüssigkeit mg/mL, Bitte kontaktieren Sie uns zuerst, wenn die Konzentration die DMSO-Löslichkeit der jeweiligen Wirkstoffcharge überschreitet. )

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzuμL PEG300, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzuμL Tween 80, mischen und aufklären, fügen Sie als Nächstes hinzu μL ddH2O, mischen und aufklären.

Methode zur Herstellung der In-vivo-Formulierung: Nehmen Sie μL DMSO Stammflüssigkeit, fügen Sie als Nächstes hinzu μL Maisöl, mischen und aufklären.

Hinweis: 1. Bitte stellen Sie sicher, dass die Flüssigkeit klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen.
2. Achten Sie darauf, die Lösungsmittel in der richtigen Reihenfolge hinzuzufügen. Sie müssen sicherstellen, dass die im vorherigen Schritt erhaltene Lösung klar ist, bevor Sie das nächste Lösungsmittel hinzufügen. Physikalische Methoden wie Vortexen, Ultraschall oder ein warmes Wasserbad können zur Unterstützung des Lösungsvorgangs verwendet werden.

Wirkungsmechanismus (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
TbAUK1
(Cell-free assay)
40 nM
Aurora B (human)
(Cell-free assay)
250 nM
In vitro
Hesperadin inhibits the ability of immunoprecipitated Aurora B to phosphorylate histone H3 with IC50 of 250 nM and markedly reduces the activity of other kinases (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1, and PHK) at a concentration of 1 μM. In contrast, only 20-100 nM of this compound is sufficient to induce the loss of mitotic histone H3-Ser10 phosphorylation in HeLa cells. Its treatment causes defects in mitosis and cytokinesis, leading to stoppage of proliferation of HeLa cells and polyploidization, which can be specifically ascribed to the inhibition of Aurora B function during the process of chromosome attachment. This compound (100 nM) quickly overrides the mitotic arrest induced by taxol or monastrol but not by nocodazole. It and nocodazole treatment in HeLa cells abolishes kinetochore localization of BubR1 and diminishes the intensity of Bub1 at kinetochores, suggesting that Aurora B function is required for efficient kinetochore recruitment of BubR1 and Bub1, which in turn might be necessary for prolonged checkpoint signaling. It prevents the phosphorylation of recombinant trypanosome histone H3 by the T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) from pathogenic Trypanosoma brucei with IC50 of 40 nM in vitro kinase assays. This chemical significantly inhibits cell growth of cultured infectious bloodstream forms (BF) with IC50 of 48 nM, and only weakly inhibits cell growth of insect stage procyclic forms (PF) with IC50 of 550 nM.
Kinase-Assay
Der Aurora B-Kinase-Assay
Für den Aurora B-Kinase-Assay werden HeLa-Zellen in einem Puffer, der 50 mM NaCl enthält, lysiert. Der Gesamtzellextrakt wird 20 Minuten lang bei 13.000 U/min und 4 °C in einer Tischzentrifuge zentrifugiert. Der aus 200 mg Gesamtzellextrakt gewonnene Pellet wird erneut in 15 ml Lysepuffer, der 250 mM NaCl enthält, extrahiert, um aktive Aurora B-Kinase aus mitotischem Chromatin zu erhalten. Der Niedriggeschwindigkeitsüberstand des letzteren Extrakts wird für die Immunpräzipitation verwendet. Monoklonales Maus-Anti-AIM-1 oder Maus-Anti-HA wird an GammaBind Plus Sepharose gekoppelt, und die Beads werden 90 Minuten lang bei 4 °C in dem Extrakt über Kopf gedreht. Die Beads werden gewaschen, aliquotiert und in Kinasepuffer (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 mM NaF) gewaschen. Der Kinase-Assay wird mit 10 μL Beads in 20 μL Kinasepuffer, der 5 μg Histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-32P]ATP und verschiedene Konzentrationen dieser Verbindung enthält, 20 Minuten lang bei 37 °C durchgeführt. SDS-Probenpuffer wird hinzugefügt, und die Proben werden gekocht und mittels SDS-PAGE aufgetrennt. Das Gel wird getrocknet, und das radioaktive Signal wird mittels PhosphorImager-Analyse detektiert. Die Daten werden mit der ImageQuant-Software analysiert.
Referenzen

Anwendungen (Applications)

Methoden Biomarker Bilder PMID
Western blot trypanosome histone H3
S1529-WB1
19320832